Observe as afi rmativas a seguir, em relação à Cito- metria de Fluxo. I. Trata-se de método rápido e objetivo que permite a determinação simultânea de múltiplos parâmetros de partículas isoladas em suspensão. II. Mede as propriedades de partículas em suspensão, orientadas num fl uxo laminar e interceptadas uma a uma por um ou mais feixes de lasers. III. A luz dispersa é coletada por um sistema ótico que permite identifi car células pelo seu tamanho e com- plexidade interna. Sobre as afi rmativas acima, pode-se dizer que:

A Citometria de Fluxo emprega três importantes siste- mas na aquisição de dados quantifi cáveis a partir de uma amostra. Um dos sistemas empregados é o sistema de fl uidos. Em relação a este sistema, é INCORRETO afi rmar que:

Conhecer a confi guração ótica dos citômetros de fl uxo disponíveis na plataforma é importante por algumas razões, EXCETO:

Em relação a fl uorocromos e corantes empregados em Citometria de Fluxo, avalie se as afi rmativas a seguir são verdadeiras (V) ou falsas (F). I. Um determinado fl uorocromo pode ser excitado apenas uma vez e depois é irreparavelmente fotobranqueado. II. Para armazenamento a longo prazo, os fl uorocromos, tipo “Tandem”, devem ser expostos à luz e congelados. III. A autofl uorescência é excitada apenas pelos lasers violeta e azul e emitida nos comprimentos de onda azul, verde e amarelo. IV. O substrato fl uorescente, denominado éster succi- nimidílico de diacetato de carboxifl uoresceína (do inglês, carboxylfl uorescein succinimidyl ester - CFSE), é um exemplo de corante de ácido nucleico, que pode ser empregado para determinar divisão celular ou viabili- dade celular. V. Os corantes de viabilidade celular associam-se sempre ao DNA. De cima para baixo, a sequência correta é:

A titulação de anticorpos é fundamental para garantir que a fl uorescência detectada seja específi ca, minimizando a superestimação ou subestimação dos sinais e obtendo resultados mais precisos. Neste sentido, a variável que infl uencia neste processo é:

A calibração diária do citômetro de fl uxo, empregando microesferas fl uorescentes mensura, EXCETO:

O atraso do tempo de acionamento do laser (do inglês, Time Delay) é importante para:

A tomada de decisão para a escolha dos fl uorocromos em um painel multiparamétrico, envolve:

Um marcador de viabilidade deve ser empregado na seguinte situação, EXCETO:

São aplicações clínicas da Citometria de Fluxo: I. Análise de reticulócitos. II. Diagnóstico e acompanhamento de leucemias e linfomas. III. Monitoramento de células CD4+ de pacientes HIV+. Das afi rmativas acima:

A atenuação de ligações não específi cas de anticorpos deve ser realizada, empregando:

Os fl uorocromos são moléculas fl uorescentes geral- mente acopladas a anticorpos com afi nidade por determi- nada molécula de interesse. Observe as afi rmativas abaixo sobre os fl uorocromos empregados em Citometria de Fluxo. I. Absorvem a luz e emitem-na no mesmo comprimento de onda. II. Os mais brilhantes devem ser usados para detecção de marcadores de menor expressão. III. APC-Cy7 e PE-Cy7 (fl uorocromos tipo “Tandem”) po- dem degradar na presença de luz, após protocolo de fi xação, temperaturas elevadas, podendo emitir sinais nos detectores primários correspondentes (APC e PE, respectivamente). Das afi rmativas acima:

São aplicações rotineiras de separação de populações (cell sorting), EXCETO:

Uma série de métodos são utilizados para separação e purifi cação de proteínas. Entre os métodos abaixo, aquele que NÃO consiste em um método de separação e purifi ca- ção de proteínas corresponde à(ao):

As técnicas de HPLC (cromatografi a líquida de alta performance, do inglês high-performance liquid chromato- graphy) e FPLC (cromatografi a líquida de proteína rápida, do inglês fast protein liquid chromatography ) têm sido utilizadas na separação e análise de proteínas. Dentre as alternativas abaixo, é INCORRETO afi rmar que:

A absorção de luz UV (ultravioleta) por proteínas tem sido analisada em detalhes e proposta como comprovação de manutenção estrutural desde os tempos iniciais da bio- logia molecular, conforme artigo publicado por D.B. Wet- laufer em 1962 na revista Advances in Protein Chemistry . A absorção de luz por proteínas neste intervalo espectral decorre principalmente das transições eletrônicas de grupos peptídicos (em 170-220 nm, nanômetros), cadeias laterais de aminoácidos aromares (próximo à 280 nm) e grupos prostéticos, cofatores e substratos ou inibidores enzimáticos (no intervalo de luz UV visível, a depender do grupo em análise). Muito embora o espectro de dicroísmo circular de uma determinada proteína represente as contribuições aditi- vas de cada tipo de estrutura secundária, cada uma destas apresentará uma assinatura óptica quanto à absorção de luz circularmente polarizada. Com base nesta informação, os comprimentos de onda e as correspondentes transições eletrônicas referentes aos espectros de dicroísmo circular de cada tipo de estrutura secundária estão corretamente descritos em:

Diferentes tipos de biosensores têm sido desenvolvidos para o estudo de interações entre macromoléculas biológi- cas. Experimentos de interação em superfícies ,tipicamente, envolvem a imobilização de uma molécula (ligante) em uma superfície e o monitoramento da interação dessa com uma segunda molécula (analito) em solução. Neste sentido, o aumento da concentração do analito na superfície do biosensor leva à mudança do índice de refração próximo à superfície. Dois principais tipos de instrumentos foram desenvolvidos para medir essa mudança com alta sensi- bilidade: interferômetros e equipamentos de ressonância plasmônica de superfície (do inglês surface plasmon reso- nance – SPR). Sobre este último, é correto afi rmar que:

A partir de um ensaio de termoforese em microescala, um estudante determinou que um anticorpo monoclonal reconhece seu antígeno com uma constante de dissocia- ção (K d) de 1,0 nM. A a energia livre (∆G) de associação do complexo antígeno-anticorpo (expressa em kcal/mol) é: (Considere os seguintes dados: ln 10 ¯⁹ = 20,723; R =1,987 cal/K.mol; T = 298 K).

A quantifi cação de parâmetros cinéticos de interações proteína-proteína tem sido utilizada para o entendimento de diversos processos biológicos, tais como transdução celular, resposta imune, atividade enzimática etc. Entre as técnicas listadas abaixo, a única que NÃO é indicada para obtenção de parâmetros cinéticos corresponde a:

Ensaios de luminescência e fl uorescência de proteínas são técnicas valiosas em biologia molecular, bioquímica e biofísica. Essas técnicas são comumente utilizadas em ensaios baseados em placa, visto que este formato permite a triagem de alto rendimento de dezenas de condições ex- perimentais ou de amostras devido à sua sensibilidade e à sua compatibilidade com leitores de microplacas. Contudo, técnicas baseadas em luminescência e em fl uorescência diferem quanto aos mecanismos de detecção e aos tipos de sinal produzidos. Entre as alternativas abaixo, é INCORRETO afi rmar que:

Espectroscopia de fl uorescência intrínseca de proteínas é um procedimento amplamente utilizado para monitorar mudanças na estrutura terciária de proteínas. Esta técnica é dependente da presença de aminoácidos aromáticos, tais como fenilalanina, tirosina e triptofano. Sobre esta técnica, é INCORRETO afi rmar que:

A medida da absorbância é comumente usada para caracterizar interações proteína-proteína. Quando associada a métodos baseados em placas, fornece uma abordagem de alto rendimento para triagem de múltiplas interações simul- taneamente. Entre os itens abaixo, o único com métodos que utilizam medidas de absorbância a partir de amostras em placas é: