Quando verificamos o número de genes evidenciados pelo Projeto Genoma Humano e o número de proteínas produzidas pelos vários tipos celulares humanos, verificamos que não há uma correlação direta. O número de genes é menor. Sendo assim, um dos mecanismos que poderia melhorar essa correlação seria:

A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) trouxe um grande avanço para o diagnóstico molecular, mas, como todo método, tem suas limitações e desvantagens quando comparado aos métodos que eram utilizados no momento. No caso da PCR convencional pode-se citar como limitação e desvantagem, respectivamente:

Na técnica da PCR alelo específico (também denominada ARMS - amplification of refractory mutation systems e PCR/ SSP - Sequence-specific Primer ) para diagnosticar uma variante patogênica:

Um indicador de qualidade para avaliação do sequenciamento de nova geração (NGS) é cobertura. Ela engloba duas variáveis: a profundidade e a amplitude, que são conceituadas como, respectivamente:

Relacione as estratégias de Sequenciamento de Nova Geração (NGS) com suas características. Coluna I 1. genoma inteiro (WGS = whole genome sequencing) 2. direcionado (painel gênico) 3. Transcriptomas 4. Seq 16Sr- Metagenomica 5. Epigenética ( Whole-genome bisulfite sequencing - WGBS) 6. Exoma (WES = whole exome sequencing) Coluna II ( ) analisa os exons de todo o genoma. ( ) analisa modificações no genoma, que não de sequência de DNA, como por exemplo regiões de metilação. ( ) analisa RNAs ribossomais (rRNAs) para caracterizar quantitativamente o microbioma. ( ) identifica o conjunto completo de transcritos (RNAs, miRNAs e outros RNAs não codificantes). ( ) método abrangente e rápido, mas que necessita de muito espaço de armazenamento de dados ( ) avalia um subconjunto de genes ou regiões do genoma, permitindo analisar as áreas de interesse, reduzindo tempo de análise e custos

A tecnologia de sequenciamento de terceira geração é caracterizada por:

Dado que o sequenciamento de nova geração (NGS) produz grandes volumes de dados, a análise simplificada de dados de bioinformática e o gerenciamento de dados são essenciais para a implementação dessas tecnologias. O fluxo de trabalho de análise de dados é normalmente subdividido em análises primárias, secundárias e terciárias. A análise primária é realizada:

A análise secundária dos dados de NGS incluem:

A análise NGS terciária envolve anotação e interpretação de variantes. Esta análise geralmente envolve anotação funcional de variantes encontradas (por exemplo, interpretação de SNP, INDEL e CNV) para determinar suas funções biológicas e patológicas. São ferramentas comuns para esta análise:

A análise de dados de NGS de RNA (Transcriptoma) pode ser mais desafiadora, dadas as complexidades do splicing alternativo e a faixa dinâmica da expressão gênica. As ferramentas comumente utilizadas são:

Observe as afirmativas a seguir, em relação à Terapia Gênica: I. Na abordagem in vivo, as sequências gênicas são inseridos nas células do paciente pelo método de eletroporação. II. Ocorre a substituição, alteração ou suplementação do material genético de células-alvo de um paciente para prevenir, tratar ou curar uma determinada doença causada por genes inativos ou disfuncionais. III. Na abordagem in vivo, as sequências gênicas são inseridas diretamente nas células do paciente, geralmente através de vetores. Das afirmativas acima:

Quando se depara com uma variante não descrita na literatura, podem-se realizar análises para prever um possível comportamento dessa variante. Seriam análises:

Observe as afirmativas a seguir, em relação ao método de edição de DNA (CRISP): I. A descoberta e aplicação do sistema CRISPR/Cas revolucionou a área da biologia molecular. II. O sistema CRISPR/Cas permite cortes precisos no DNA, facilitando a edição de sequências genéticas. III. Uma das limitações do sistema CRISPR/Cas é não poder ser utilizado em célula vegetal. Das afirmativas acima:

Ao detectar uma variante em um sequenciamento (NGS), verifica-se que a variante teve baixa cobertura. Seria adequado:

Um dos quesitos importantes para a gestão de qualidade de um laboratório é a calibração de seus instrumentos. Sendo assim, os instrumentos:

Segundo a RESOLUÇÃO ANVISA - RDC Nº 786, DE 5 DE MAIO DE 2023, o Serviço (unidade que executa atividades relacionadas aos exames laboratoriais) que pode desenvolver e utilizar Metodologia Própria é do tipo: