Quando verificamos o número de genes evidenciados pelo Projeto Genoma Humano e o número de proteínas produzidas pelos vários tipos celulares humanos, verificamos que não há uma correlação direta. O número de genes é menor. Sendo assim, um dos mecanismos que poderia melhorar essa correlação seria:

A duplicação (Replicação) do DNA in vivo em eucariotos ocorre:

Relacione a função celular com as diferentes classes de RNA. Coluna I 1. estrutural e catalítica 2. informacional 3. translacional 4. regulatórios Coluna II ( ) RNAs mensageiros (mRNAs) ( ) RNAs ribossomais (rRNAs) ( ) RNAs transportadores (tRNAs) ( ) Pequenos RNAs nucleares (snRNAs, snoRNAs) ( ) RNAs não codificadores (miRNAs, lincRNAs) A sequência correta, de cima para baixo, é:

A enzima responsável pela transcrição de mRNA em eucariotos é a RNA polimerase:

Em eucariotos, o processamento do mRNA (“ splicing”) ocorre de várias formas (Alça, laço). As sequências gênicas fundamentais para esse processo são:

As etapas básicas para a formação de um DNA recombinante (clonagem) são:

O tipo de mutação mais difícil de ser classificada como deletéria (patogênica) é:

Um passo importante da clonagem é a seleção do clone recombinante. Os Plasmídeos da série pUC possuem um gene (lacZ) que codifica a produção da enzima β-galactosidase. A inserção do DNA exógeno (inserto) no sítio de clonagem do plasmídeo causa a interrupção do gene, levando à perda da função da β-galactosidase, mudando a cor da colônia para branca. Assim as colônias bacterianas são:

No caso do Câncer Colorretal Hereditário há uma mutação que pode ocorrer em vários genes que estão envolvidos em um sistema de reparo. Este reparo seria o:

Seriam elementos Cis e Trans da regulação da síntese proteica, respectivamente:

Uma ferramenta amplamente utilizada na genômica funcional é o silenciamento gênico. Pode ser transitório ou estável, dependendo do tipo de molécula que está sendo utilizada. No caso do silenciamento transitório, geralmente se utiliza como ferramenta:

Para testar se uma sequência de DNA (fragmento) tem propriedades de induzir a transcrição, pode-se utilizar o:

A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) trouxe um grande avanço para o diagnóstico molecular, mas, como todo método, tem suas limitações e desvantagens quando comparado aos métodos que eram utilizados no momento. No caso da PCR convencional pode-se citar como limitação e desvantagem, respectivamente:

Em um teste molecular para identificar a mutação F508del da Fibrose cística (autossômica recessiva), foi utilizada a Reação em Cadeia da Polimerase associada à digestão com uma enzima de restrição específica. No entanto, ao realizar a PCR, muitos fragmentos foram sintetizados, impedindo o seguimento do teste. Para resolver esse problema, a solução seria:

Para a identificação e quantificação de um vírus que tenha como material genético o RNA, o método apropriado seria:

Ao se realizar um sequenciamento de Sanger do gene β globina para identificação das mutações de um paciente com diagnóstico de Talassemia Beta, foi encontrada uma variante patogênica (deletéria), uma mutação sem sentido, no códon 39 em homozigose. No entanto, ao se analisarem os pais desse paciente, apenas o pai apresentava essa variante. Partindo do princípio de que as reações de sequenciamento foram bem-sucedidas e com alta qualidade, uma possível explicação seria:

Uma ferramenta muito utilizada na Biologia Molecular é a enzima de restrição. O uso dessa enzima permite diferenciar a presença ou não de determinada variante. Uma determinada enzima de restrição tem um sítio de corte justamente em uma sequência mutante e não tem sítio de corte na sequência normal. Assim, ao se realizar uma Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), seguida da digestão enzimática específica, na eletroforese, espera-se encontrar em um indivíduo heterozigoto:

Nos casos em que é necessário sintetizar simultaneamente várias regiões gênicas simultaneamente, deve-se utilizar:

Na técnica da PCR alelo específico (também denominada ARMS - amplification of refractory mutation systems e PCR/ SSP - Sequence-specific Primer ) para diagnosticar uma variante patogênica:

Os estudos de Epigenética do Genoma (WGBS) tem como ponto fundamental a análise da metilação do DNA (5mC). Para permitir essa análise é necessário o uso de:

Um indicador de qualidade para avaliação do sequenciamento de nova geração (NGS) é cobertura. Ela engloba duas variáveis: a profundidade e a amplitude, que são conceituadas como, respectivamente:

Relacione as estratégias de Sequenciamento de Nova Geração (NGS) com suas características. Coluna I 1. genoma inteiro (WGS = whole genome sequencing) 2. direcionado (painel gênico) 3. Transcriptomas 4. Seq 16Sr- Metagenomica 5. Epigenética ( Whole-genome bisulfite sequencing - WGBS) 6. Exoma (WES = whole exome sequencing) Coluna II ( ) analisa os exons de todo o genoma. ( ) analisa modificações no genoma, que não de sequência de DNA, como por exemplo regiões de metilação. ( ) analisa RNAs ribossomais (rRNAs) para caracterizar quantitativamente o microbioma. ( ) identifica o conjunto completo de transcritos (RNAs, miRNAs e outros RNAs não codificantes). ( ) método abrangente e rápido, mas que necessita de muito espaço de armazenamento de dados ( ) avalia um subconjunto de genes ou regiões do genoma, permitindo analisar as áreas de interesse, reduzindo tempo de análise e custos

Segundo “the American College of Medical Genetics and Genomics and the Association for Molecular Pathology”, as variantes gênicas são classificadas em:

A tecnologia de sequenciamento de terceira geração é caracterizada por:

Dado que o sequenciamento de nova geração (NGS) produz grandes volumes de dados, a análise simplificada de dados de bioinformática e o gerenciamento de dados são essenciais para a implementação dessas tecnologias. O fluxo de trabalho de análise de dados é normalmente subdividido em análises primárias, secundárias e terciárias. A análise primária é realizada:

A análise secundária dos dados de NGS incluem:

A análise NGS terciária envolve anotação e interpretação de variantes. Esta análise geralmente envolve anotação funcional de variantes encontradas (por exemplo, interpretação de SNP, INDEL e CNV) para determinar suas funções biológicas e patológicas. São ferramentas comuns para esta análise:

A análise de dados de NGS de RNA (Transcriptoma) pode ser mais desafiadora, dadas as complexidades do splicing alternativo e a faixa dinâmica da expressão gênica. As ferramentas comumente utilizadas são:

Observe as afirmativas a seguir, em relação aos microarrays. I. É uma ótima ferramenta para estudos de expressão gênica. II. Pode ser utilizado para identificar polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs). III. É utilizado na detecção direta de patógenos. Sobre as afirmativas acima, pode-se dizer que:

Correlacione os grupos de variantes com o seu significado: Coluna I 1. InDels 2. SNPs 3. SNVs 4. CNVs Coluna II ( ) são alterações de um único nucleotídeo na sequência de DNA ou, em outras palavras, a troca de um nucleotídeo por outro, identificadas em pelo menos 1% da população. ( ) são sequências do DNA e variam em seu número de cópias . ( ) são alterações de um único nucleotídeo na sequência de DNA. ( ) são adições ou perdas de uma ou mais bases consecutivas na sequência do DNA. A sequência correta, de cima para baixo, é:

Observe as afirmativas a seguir, em relação à Terapia Gênica: I. Na abordagem in vivo, as sequências gênicas são inseridos nas células do paciente pelo método de eletroporação. II. Ocorre a substituição, alteração ou suplementação do material genético de células-alvo de um paciente para prevenir, tratar ou curar uma determinada doença causada por genes inativos ou disfuncionais. III. Na abordagem in vivo, as sequências gênicas são inseridas diretamente nas células do paciente, geralmente através de vetores. Das afirmativas acima:

Quando se depara com uma variante não descrita na literatura, podem-se realizar análises para prever um possível comportamento dessa variante. Seriam análises:

Observe as afirmativas a seguir, em relação ao método de edição de DNA (CRISP): I. A descoberta e aplicação do sistema CRISPR/Cas revolucionou a área da biologia molecular. II. O sistema CRISPR/Cas permite cortes precisos no DNA, facilitando a edição de sequências genéticas. III. Uma das limitações do sistema CRISPR/Cas é não poder ser utilizado em célula vegetal. Das afirmativas acima:

Ao detectar uma variante em um sequenciamento (NGS), verifica-se que a variante teve baixa cobertura. Seria adequado:

Em relação às Boas Práticas Laboratoriais, avalie se são verdadeiras (V) ou falsas (F) as afirmativas a seguir: I. Os resíduos sólidos ou líquidos contaminados devem ser tratados (inativados ou descontaminados) antes do descarte. II. Material perfuro-cortante deve ser descartado em recipientes resistentes à perfuração. III. Pipetar com a boca é vedado e jamais se devem colocar na boca objetos de uso no laboratório (canetas, lápis, borrachas, pipetas, entre outros). As afirmativas I, II e III são, respectivamente:

Relacione as práticas adequadas e não adequadas em um laboratório: Coluna I 1. adequada 2. não adequada Coluna II ( ) comer ou armazenar alimentos para consumo. ( ) beber. ( ) fumar. ( ) mascar chicletes. ( ) manusear lentes de contato. ( ) aplicar cosméticos . A sequência correta, de cima para baixo, é:

Um laboratório que utilize o vírus da Febre Amarela e da Hepatite B, vírus esses que levam a um risco individual moderado e a um risco para a comunidade baixo, é classificado em termos de biossegurança em:

Com relação ao laboratório que utilize o vírus da Febre Amarela e da Hepatite B é correto afirmar que:

Um dos quesitos importantes para a gestão de qualidade de um laboratório é a calibração de seus instrumentos. Sendo assim, os instrumentos:

Segundo a RESOLUÇÃO ANVISA - RDC Nº 786, DE 5 DE MAIO DE 2023, o Serviço (unidade que executa atividades relacionadas aos exames laboratoriais) que pode desenvolver e utilizar Metodologia Própria é do tipo: