Em um paciente de 35 anos, imunocompetente, com tomografi a de tórax evidenciando lesão escavada de lobo pulmonar superior direito, sugestiva tuberculose, teste rápido molecular para M. tuberculosis negativo em duas amostras distintas de escarro, com baciloscopia positiva ++/+++, a etiologia mais provável é:

Um paciente transplantado renal em uso de ciclosporina, micofenolato e prednisona refere que duas semanas após sessões de acupuntura notou o aparecimento de lesões nodulares em membros superiores e inferiores. As lesões progrediram e algumas passaram a apresentar supuração e ulceração central. A baciloscopia do material coletado das lesões evidenciou numerosos bacilos álcool-ácido resistentes, mas a cultura realizada em meio de Lowenstein-Jensen por 42 dias a 37°C foi negativa. Considerando que o paciente não havia sido submetido a tratamento antimicrobiano previamente à coleta da amostra clínica, a etiologia mais provável é:

Uma nova amostra clínica do paciente da questão anterior foi coletada e enviada para o Laboratório de Referência em Micobactérias da FIOCRUZ. Considerando a história clínica e a falha no crescimento em meio de Lowenstein-Jensen, o processamento da amostra clínica deverá incluir semeadura em:

Para que um bacilo álcool-ácido resistente possa ser classificado fenotipicamente como micobactéria de crescimento rápido, a formação de colônias visíveis a olho nu, em meio sólido, deve ocorrer em até:

Nos testes moleculares para detecção das espécies do complexo Mycobacterium tuberculosis, pelo fato de que na maioria dos isolados está presente em múltiplas cópias, frequentemente é utilizado como alvo a sequência de inserção:

O tratamento de amostras do trato respiratório para eliminação da microbiota normal e concentração de micobactérias é importante para aumentar a sensibilidade da cultura. Por outro lado, o efeito letal dos métodos de descontaminação deve ser minimizado e a concentração de micobactérias deve ser maximizada por centrifugação, sempre considerando a segurança do analista. Devem ser utilizados, portanto:

Segundo o MANUAL DE RECOMENDAÇÕES PARA O DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DE TUBERCULOSE E MICOBACTÉRIAS NÃO TUBERCULOSAS DE INTERESSE EM SAÚDE PÚBLICA NO BRASIL, publicado pelo Ministério da Saúde em 2022, todos os laboratórios que manuseiam amostras para testes diagnósticos para tuberculose devem ter pronto kit para ser utilizado em caso de derrame de material biológico fora da cabine de segurança biológica. São itens obrigatórios nesse kit, EXCETO :

A identifi cação molecular de micobactérias é essencial para que se conheça a epidemiologia das diferentes espécies. Com a redução do custo do sequenciamento de DNA e aumento da disponibilidade de sequenciadores de DNA, a amplifi cação e sequenciamento parcial de genes de cópia única tem sido cada vez mais utilizada nos laboratórios de micobactérias. São utilizados mais frequentemente os seguintes alvos gênicos para essa fi nalidade:

A cepa de controle de qualidade a ser utilizada nos testes de sensibilidade do Complexo M. tuberculosis é:

Uma das tarefas do laboratório de referência em micobactérias é a diferenciação entre M. bovis e as demais espécies do Complexo M. tuberculosis e a diferenciação entre M. bovis BCG e demais cepas de M. bovis. Essa diferenciação pode ser alcançada utilizando-se uma PCR que tem como alvo:

O Brasil, apesar da grande biodiversidade, consta na literatura indexada, como origem infrequente de relatos de novas espécies bacterianas. A espécie de micobactéria de crescimento rápido descrita por autor brasileiro (Costa Cruz em 1938) e isolada no Brasil, frequentemente detectada em infecções secundárias a mamoplastias é:

A taxonomia de micobactérias de crescimento rápido tem sido objeto de grande discussão, face às novas evidências geradas pelo sequenciamento completo dos genomas. Por outro lado, a segurança do paciente impõe uma limitação nas alterações taxonômicas. A nomenclatura vigente no “List of Prokaryotic names with Standing in Nomenclature” para o Complexo M. abscessus é:

A correta identifi cação molecular das espécies de micobactérias de crescimento rápido é essencial para guiar a terapia antimicrobiana empírica, e serve como um controle de qualidade dos resultados dos testes de sensibilidade in vitro. A expressão de resistência indutiva à claritromicina é frequente em:

A resistência à claritromicina NÃO é comum na espécie:

Segundo as normas vigentes do Ministério da Saúde e da Agência Nacional de Vigilância Sanitária, os testes de sensibilidade a antimicrobianos no Brasil devem ser realizados seguindo as normas da versão brasileira do European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing, o BrCAST. Entretanto, ainda não foram defi nidos pelo BrCAST pontos de corte para os testes de sensibilidade para micobactérias de crescimento rápido, e para o complexo M. tuberculosis ainda não há pontos de corte para os fármacos de primeira e segunda linhas. Enquanto não há critérios defi nidos pelo BrCAST, os métodos e critérios utilizados no Brasil para os testes de sensibilidade de micobactérias têm sido aqueles preconizados pelo Clinical and Laboratory Standards Institute no documento M24. Para as micobactérias de crescimento rápido o teste deve ser realizado com:

Segundo o documento M24 do CLSI algumas cepas M. abscessus necessitam de incubação por até 14 dias para que possa ser feita a leitura dos testes de sensibilidade. Nesses casos, em função da instabilidade de alguns antimicrobianos, deve ser incluída nota explicativa no laudo e devem ser interpretados e reportados apenas:

Em função da posologia de dose única diária, frequentemente é solicitado ao laboratório avaliar a sensibilidade ao ertapenem para micobactérias de crescimento rápido. O médico solicitante deve ser informado de que:

Um dos indicadores de qualidade do laboratório de micobactérias é o índice de contaminação de culturas de amostras do trato respiratório, em meio sólido, submetidas a descontaminação. Esse índice de ser aferido e avaliado mensalmente, e deve ser de:

A estrutura adequada de um laboratório que trabalha com Mycobacterium tuberculosis deve ter um sistema de exaustão de ar independente, de modo que em caso de acidente com gerações de aerossóis fora da cabine de segurança biológica haja contenção adequada. A recomendação do MANUAL DE RECOMENDAÇÕES PARA O DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DE TUBERCULOSE E MICOBACTÉRIAS NÃO TUBERCULOSAS DE INTERESSE EM SAÚDE PÚBLICA NO BRASIL é a instalação de exaustor, com capacidade de:

O uso de testes imunocromatográfi cos (imuno ensaio de fl uxo lateral) permite a rápida diferenciação entre espécies do Complexo M. tuberculosis e as demais micobactérias crescidas em cultura. O antígeno pesquisado, presente exclusivamente nas espécies do Complexo M. tuberculosis é:

Considerando a difi culdade na eliminação da microbiota normal associada a algumas amostras clínicas, é INADEQUADA para diagnóstico de tuberculose por cultura e deve ser solicitada nova coleta se a amostra for:

A recomendação do MANUAL DE RECOMENDAÇÕES PARA O DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DE TUBERCULOSE E MICOBACTÉRIAS NÃO TUBERCULOSAS DE INTERESSE EM SAÚDE PÚBLICA NO BRASIL para laudos de baciloscopia de escarro é que a quantifi cação de bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR) seja reportada em cruzes. Uma correlação correta entre número de bacilos observados e quantidade de cruzes a serem reportadas é:

As espécies do Complexo Mycobacterium tuberculosis compartilham características fenotípicas que permitem diferenciá-las de outras espécies, pois são:

Os métodos de tratamento, também denominados de métodos de fl uidifi cação e descontaminação, são utilizados para amostras clínicas com microbiota normal associada. Eles são necessários para isolamento de micobactérias em cultura, mas afetam em maior ou menor grau a viabilidade das micobactérias. O método recomendado para amostras paucibacilares e o método recomendado para amostras de escarro contaminadas com Pseudomonas são, respectivamente:

Os métodos moleculares podem ser úteis para dar suporte ao uso da claritromicina no tratamento das infecções por M. abscessus subsp. abscessus sem a necessidade de incubação por 14 dias para avaliação da resistência indutiva. O gene a ser sequenciado e a interpretação quanto à atividade da claritromicina são:

Um dos passos críticos para a qualidade dos resultados dos testes de sensibilidade utilizando insumos preparados no laboratório é a leitura atenta e interpretação correta dos certifi cados de qualidade. Ao preparar uma solução de antimicrobiano cujo certifi cado de qualidade indica pureza de 90,0% por HPLC, conteúdo de água (Karl Fischer) de 10,0% e fração ativa de 100%, o analista deverá considerar uma potência de:

A resistência aos fármacos utilizados no tratamento da tuberculose é um problema crescente no Brasil e no mundo. A resistência extensiva em M. tuberculosis é defi nida como:

O racional para o tratamento inicial da tuberculose com quatro fármacos decorre do fato de que há:

O Ministério da Saúde recomenda que seja realizada a cultura para micobactérias e o teste de sensibilidade nas seguintes situações, EXCETO:

A mutação mais frequentemente detectada no gene rpoB em cepas de M. tuberculosis resistentes à rifampicina e rifabutina é:

Consistem em vantagens do Xpert® MTB/RIF Ultra em comparação com a versão Xpert® MTB/RIF, EXCETO:

A resistência à bedaquilina ocorre mais frequentemente por mutações no gene:

A coleta de lavado gástrico é utilizada quando há suspeita de tuberculose pulmonar em crianças que não conseguem expectorar. Caso a amostra não seja processada em até 4 horas após a coleta, deve-se adicionar a cada 5 a 10 ml de lavado gástrico:

Para o isolamento de Mycobacterium genavense e Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis, o ágar Middlebrook 7H11 deve ser suplementado com:

O Bactec 960 é um dos sistemas de automação mais utilizados em laboratórios de micobactérias e utiliza o MGIT (Mycobacterium Groth Indicator Tube), que consiste em tubo com caldo 7H9 e:

Os ensaios baseados na produção de interferon gama após exposição a antígenos específi cos de M. tuberculo- sis têm sido utilizados para o diagnóstico da tuberculose latente. Uma diferença menor que 0,50 entre a quantidade de interferon gama no tubo com mitógeno inespecífi co e o tubo sem mitógeno indica:

Ao reportar testes de sensibilidade de M. kansasii é correto incluir no laudo, EXCETO:

Considerando a variável humana de aquecimento da solução de fucsina, o ideal em termos de qualidade é que o controle interno da baciloscopia, com lâminas positivas e negativas da rotina, seja realizado:

Um dos princípios de boas práticas de controle e garantia de qualidade é que as amostras de controle de qualidade externo sejam processadas:

Quanto aos testes de sensibilidade para as espécies do Complexo M. avium-M . intracellulare, segundo o documento M24 do CLSI, devem ser testadas por microdiluição e reportadas: